Načelo delovanja Pasteurjeve pipete temelji predvsem na gravitacijskem-toku in kapilarnem delovanju v kombinaciji z ročnim nadzorom diferenčnega zračnega tlaka za lažjo aspiracijo in prenos tekočin.
Ročna kontrola sesanja: Operater izvaja sesanje na širokem koncu pipete-bodisi oralno ali s pomočjo pomožne gumijaste mehke-, da ustvari podtlak v cevki in tako potegne tekočino v fino konico.
Gravitacijsko-doziranje: Ko se sesanje sprosti, tekočina naravno steče ven pod vplivom gravitacije; doziranje si lahko pomagate tudi z nežnim stiskanjem telesa pipete ali nagibanjem sprejemne posode.
Ponovljivost kapljic: s kalibracijo razmerja "kapljic na mililiter" pipeta omogoča približen kvantitativni prenos, zaradi česar je primerna za postopke, ki zahtevajo ponovljivost in ne absolutne natančnosti.
Zagotavljanje sterilnosti: Pred uporabo lahko v širši konec vstavite vatirano palčko in jo sterilizirate, da preprečite kontaminacijo z mikrobi med ravnanjem-, kar je še posebej pogosto pri mikrobioloških poskusih.